Aby móc ekstrahować pigmenty z chloroplasty są zawieszone w buforze izolacyjnym. Aby móc wydobyć pigmenty z chloroplastów, musimy najpierw pozbyć się buforu. Jaki jest najlepszy sposób na oddzielenie chloroplastów od buforu? użyj wirówki do oddzielenia
Jak izolujesz chloroplast?
W metodzie izolacji chloroplastów, ściana komórkowa jest łamana mechanicznie za pomocą blendera lub homogenizatora. Następnie nieuszkodzoną tkankę liściową i resztki komórkowe są usuwane przez filtrację. Chloroplasty są zbierane przez wirowanie przy użyciu gradientu percoll.
Jak zrobić bufor do izolacji chloroplastów?
Przygotuj wymaganą ilość 1X buforu izolującego Chloroplast rozcieńczając bufor 2X 1:1 wodą dH2O Dodaj 10 µL 10% roztworu BSA na ml 1X Chloroplastu Bufor izolacji. Tuż przed użyciem dodaj 1 µL DTT na 1 mL Chloroplast Isolation Buffer. Oznacz ten bufor jako „Pełny bufor”.
Co znajduje się w buforze do izolacji chloroplastów?
Bufor do izolacji DNA składał się z 100 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl (pH 8,0), 50 mM EDTA i 1 mM DTT Lizę chloroplastów uzyskano przez inkubację osad chloroplastowy z 8 ml buforu do izolacji DNA, 1,5 ml 20% SDS, 20 µl 2-merkaptoetanolu i 30 µl proteinazy K (10 mg/ml) do probówki do wirowania w temperaturze 55°C przez 4 godz.
Jakie jest pH buforu używanego do homogenizacji liści szpinaku w protokole izolacji chloroplastów?
Szpinak jest naładowany dobrymi chloroplastami, które łatwo izolują. Będziesz musiał umieścić liście w zimnej blenderze z 0,1 M buforem fosforanowym, pH 7,5 i 0,5 M sacharozą, aby nie pękły.
