Wytyczne dotyczące rozmrażania komórek
- Szybko rozmrozić zamrożone komórki (< 1 minuta) w łaźni wodnej o temperaturze 37°C.
- Rozmrożone komórki należy powoli rozcieńczyć przed ich inkubacją, używając wstępnie ogrzanej pożywki wzrostowej.
- Płytkowe rozmrożone komórki o wysokiej gęstości w celu optymalizacji regeneracji.
- Zawsze stosuj odpowiednią technikę aseptyczną i pracuj w okapie z przepływem laminarnym.
Dlaczego rozmrażanie komórek zostało zakończone?
Właściwe rozmrażanie komórek jest niezbędne, aby utrzymać żywotność kultury i umożliwić jej szybszy powrót do zdrowia. Niektóre krioprotektanty, takie jak DMSO, są toksyczne powyżej 4 °C. Dlatego ważne jest, aby kultury były szybko rozmrażane i rozcieńczane w pożywce hodowlanej, aby zminimalizować efekty toksyczne.
Jak wygląda proces rozmrażania?
Rozmrażanie to proces przenoszenia zamrożonego produktu z zamrożonego do temperatury (zwykle powyżej 0°C), w której nie ma resztek lodu, tj. „rozmrażanie”. Rozmrażanie jest często uważane po prostu za odwrócenie procesu zamrażania.
Jaki jest najlepszy sposób na zamrożenie komórek?
Zamrażaj komórki powoli, zmniejszając temperaturę o około 1°C na minutę za pomocą krio-zamrażarki o kontrolowanej szybkości lub pojemnika do krio-zamrażania, takiego jak „Mr. Frosty”, dostępne w firmie Thermo Scientific Nalgene labware (Nalge Nunc). Zawsze używaj zalecanego medium zamrażającego.
Jak rozmrozić komórkę podstawową?
Wytrzyj zewnętrzną część fiolki z komórkami 70% etanolem lub izopropanolem. W szafie bezpieczeństwa biologicznego przekręć nakrętkę o ćwierć obrotu, aby zmniejszyć ciśnienie wewnętrzne, a następnie dokręć ponownie. Szybko rozmroź komórki w łaźni wodnej o temperaturze 37°C delikatnie obracając fiolkę. Wyjmij fiolkę, gdy pozostanie niewielka ilość lodu.
