Trawienie restrykcyjne odbywa się poprzez inkubację docelowej cząsteczki DNA z enzymami restrykcyjnymi - enzymami, które rozpoznają i wiążą określone sekwencje DNA i rozszczepiają określone nukleotydy w obrębie sekwencji rozpoznawanej lub poza nią sekwencji rozpoznawania.
Jak trawią enzymy restrykcyjne?
Protokół trawienia enzymów restrykcyjnych
- Dodaj komponenty do czystej probówki w pokazanej kolejności: …
- Inkubuj reakcję w temperaturze rozkładu (zwykle 37 °C) przez 1 godzinę.
- Zatrzymaj trawienie przez inaktywację termiczną (65 °C przez 15 minut) lub dodanie 10 mM końcowego stężenia EDTA.
Czy enzym restrykcyjny trawi DNA?
Enzymy restrykcyjne mogą być również używane do generowania zgodnych końców produktów PCR. … We wszystkich przypadkach jeden lub więcej enzymów restrykcyjnych są używane do trawienia DNA, które powstało w postaci bezkierunkowej lub kierunkowej insercji do kompatybilnego plazmidu.
Jak działają enzymy restrykcyjne DNA?
Jak działają enzymy restrykcyjne? Jak wszystkie enzymy, enzym restrykcyjny działa przez dopasowanie kształtu do kształtu Kiedy wchodzi w kontakt z sekwencją DNA o kształcie pasującym do części enzymu, zwanej miejscem rozpoznawania, owija się wokół DNA i powoduje przerwanie obu nici cząsteczki DNA.
Jaki enzym trawi DNA?
Te enzymy nazywane są endonukleazami restrykcyjnymi lub enzymami restrykcyjnymi i są w stanie przecinać cząsteczki DNA w pozycjach, w których obecne są określone krótkie sekwencje zasad.