Poniżej znajduje się przegląd różnych etapów protokołu pośredniego barwienia immunofluorescencyjnego
- Planowanie eksperymentu i przygotowanie próbki. …
- Umocowanie próbki. …
- Przepuszczalność komórek. …
- Blokowanie. …
- Inkubacja przeciwciał pierwotnych. …
- Inkubacja przeciwciał wtórnych. …
- Kontrast i mocowanie.
Jak wykonać immunofluorescencję?
Wszystkie etapy inkubacji odbywają się w temperaturze pokojowej
- Umyj komórki dwukrotnie i użyj pęsety, aby ostrożnie umieścić szkiełko nakrywkowe z odwróconymi komórkami do nawilżonej komory.
- Utrwal 4% formaldehydem przez 10 minut i umyj 3 ×.
- Permeabilizuj za pomocą 0,1% TX-100/PBS przez 15–20 minut i przemyj 3 ×.
Jak wykorzystać immunofluorescencję w komórce?
Protokół immunofluorescencyjny dla komórek przylegających
- Posiew 1–1,5 x104 komórek na studzienkę 4-komorowego szkiełka w 500 mL pożywki hodowlanej. Inkubować w 37°C przy 5% CO2.
- 32–36 godzin po wysianiu komórek, usuń pożywkę do hodowli komórkowej i wypłucz komórki 3 razy przy użyciu 500 µL 1X PBS.
Jaki jest przykład immunofluorescencji?
Na przykład badacz może stworzyć przeciwciała pierwotne u kozy, które rozpoznają kilka antygenów, a następnie zastosować sprzężone z barwnikiem przeciwciała królicze, które rozpoznają region stały przeciwciała koziego ( królicze przeciwciała przeciw kozie).
Jakie jest zastosowanie barwienia immunofluorescencyjnego?
Barwienie immunofluorescencyjne (IF) jest szeroko stosowaną techniką w badaniach biologicznych i diagnostyce klinicznej IF wykorzystuje przeciwciała znakowane fluorescencyjnie w celu wykrywania określonych antygenów docelowych. Po obrazowaniu jest to bardzo bezpośrednia technika, ponieważ można rzeczywiście coś zobaczyć.
